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技術篇

【亚游ASIA GAME談技術】實驗室檢測沙門氏菌的關鍵控製要點分享

發布時間:2018-12-20

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  沙門氏菌的檢測在國內的產品標準中幾乎全部都有所涉及,隨著2014年7月1日起《GB 29921-2013 食品安全國家標準 食品中致病菌限量》標準的實施,國內預包裝產品的致病菌項目中的沙門氏菌檢驗項目也發生了變化,以前同一批次的樣品中隻要有1份未檢出即可報告結果,而現在需要檢驗5份樣品,每份都不得檢出才能報告合格結果。這一限量標準的變化也增加了食品生產企業對生產環節的要求,同樣也增加了一線檢驗人員的工作量。

  現在市麵上雖然已經有很多沙門氏菌的快速檢測方法,但是對於國內大部分企業或者第三方檢測機構來說,用的最多的應該還是《GB 4789.4-2016  食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》這一傳統的方法。下麵就跟大家交流一下我們在日常檢測沙門氏菌需要注意的一些問題,如果有什麽地方說得不對的也請大家批評指正。

硬件方麵

  沙門氏菌的檢測要在二級生物安全實驗室(需要配備生物安全櫃)中進行,特別是有檢出疑似菌進行生化鑒定以及血清學鑒定的時候,切記一定要在生物安全櫃中進行操作,並做好相應的使用記錄。

培養基、生化試劑及血清方麵

  目前食品微生物檢測所涉及的培養基和生化試劑等都需要根據《GB4789.28食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的質量要求》進行質量控製及驗收。沙門氏菌檢測中所用到的BS平板、XLD平板、沙門顯色平板、TSI等培養基,還有生化鑒定試劑盒以及O多價診斷血清A-F,H多價診斷血清都需要使用標準菌株進行質量控製,以保證實驗室最終檢測結果的準確性,這裏因為涉及到標準菌株的使用,需要在生物安全櫃中操作,相應的記錄也要有。

  另外,用於二次選擇增菌的TTB和SC培養基,以及用於選擇分離的BS、XLD培養基建議現配現用,需要注意的是配製的時候隻需要加熱煮沸即可,這裏建議盛裝的容器(燒杯或三角燒瓶等)預先經過高壓濕熱滅菌,以減少汙染雜菌對檢測過程的幹擾。還有TTB配製所需的碘液一定要避光保存。

檢測過程方麵

1、前增菌和二次增菌不可少

  現在市麵上雖然已經有很多沙門氏菌的快速檢測方法,但是對於國內大部分企業或者第三方檢測機構來說,用的最多的應該還是《GB 4789.4-2016  食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》這一傳統的方法。下麵就跟大家交流一下我們在日常檢測沙門氏菌需要注意的一些問題,如果有什麽地方說得不對的也請大家批評指正。

2、要防止幹擾及誤判,盡可能多地挑取可疑菌

  一般實驗室都會挑取選擇性培養基上典型的沙門氏菌特征菌落如黑色中央的菌落做後續鑒定,而未選取非典型菌落。通常的沙門氏菌在HE瓊脂(HE)或木糖賴氨酸瓊脂(XLD)上不發酵乳糖(不產生黃色菌落),而亞利桑那沙門氏菌具有緩慢發酵乳糖的特性,如實驗人員缺乏足夠經驗,可能忽略黃色菌落,導致漏檢。

  還有,如果檢品中的汙染菌比較複雜,也要盡量多挑取可疑菌進行生化鑒定以及血清學鑒定。如弗氏枸櫞酸杆菌可在24h 時形成具有沙門氏菌典型特征的菌落,生化反應與沙門氏菌相似,並且與沙門氏菌診斷血清有輕微的交叉反應,可能導致出現假陽性結果;粘質沙雷氏菌在科瑪嘉沙門氏菌顯色培養基上的顏色與典型的沙門氏菌的紫紅色很接近。

  實驗人員切記不可隻看選擇性培養基上的特征和TSI 特征符合就報結果,沒有把關鍵的生化反應(如賴氨酸脫羧酶和血清型試驗A-F-O 多價)完成。這些都可能導致假陽性的結果。

3、TSI接種注意事項

  實驗的時候需要先劃線再穿刺,如果先穿刺再劃線,由於菌含量太高,如果產H2S變黑,底層產酸現象的觀察會受影響,還有就是,如果產氣比較多的話,培養基會被頂出老高,嚴重的話還有可能會頂開試管塞。

4、血清學鑒定注意事項

  血清學鑒定的時候一定要用生理鹽水做對照,以免出現假陽性的結果。

結果判定方麵

  實驗人員一定要綜合生化試驗以及血清學鑒定的結果才能最終判定檢出還是未檢出沙門氏菌。

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